眾所周知，紫外-可見分光光度計是一種應(yīng)用廣泛的分析儀器。目前，它已成為一種歷史悠久、用途廣泛、覆蓋面廣的分析儀器。它有廣泛的應(yīng)用。它已被用于醫(yī)藥、醫(yī)療衛(wèi)生、化工、環(huán)保、地質(zhì)、機械、冶金、石油、食品、商檢、生命科學(xué)、材料科學(xué)、計量科學(xué)、農(nóng)業(yè)科學(xué)、林業(yè)科學(xué)、漁業(yè)科學(xué)等領(lǐng)域的科學(xué)研究、教學(xué)和生產(chǎn)，使用zui多分析儀器。其應(yīng)用主要包括定性分析、純度檢查、參與結(jié)構(gòu)分析、參與定性分析、氫鍵強度測定、復(fù)雜組成和穩(wěn)定常數(shù)測定、反應(yīng)動力學(xué)研究等。，特別是在有機分析中應(yīng)用非常廣泛。本節(jié)將簡要討論紫外-可見分光光度計在定量分析、定性分析、純度檢驗、結(jié)構(gòu)分析等方面的應(yīng)用。

一、定量分析方法

定量分析是紫外-可見分光光度計中較主要的應(yīng)用。本節(jié)簡要介紹了7種定量分析方法及其具體應(yīng)用實例。

(1)方法目前，紫外可見分光光度計&mdash的多種分析方法中廣泛使用zui這個方法。這是一種基于比爾定律的定律。基于Bc的分析方法。特定波長下物質(zhì)的ε；該值是常數(shù)，應(yīng)時比色皿的光路也是常數(shù)。因此，紫外-可見分光光度計可用于λ；在較大波長下，測量樣品溶液的吸光度值。然后，根據(jù)比爾定律，c = A/(&ε；b)可以獲得樣品溶液的含量或濃度。

(2)標準方法在選定的波長和相同的測試條件下測試標準樣品溶液C標準和測試樣品溶液(分別為樣品吸光度標準和樣品A)。然后，根據(jù)以下公式確定樣品溶液的濃度或含量。

(3)比吸收系數(shù)法常用于藥物分析。該原理由以下公式描述:

該公式中，標準物質(zhì)的比吸收系數(shù)可通過實際測試獲得，也可在相關(guān)手冊中找到。是測試樣品的片劑吸收系數(shù)。

例如，對于純呋喃唑酮，α(367納米)= 746。在相同的試驗條件下，濃度為0.001%的呋喃唑酮樣品的吸光度值為A=0.739，結(jié)果為=739。樣品中呋喃唑酮的含量為:(739/746) X100%=99.06%。

多吸收系數(shù)法用于測定樣品溶液的濃度。然而，根據(jù)比爾定律(Beer's Law)，待測樣品溶液的濃度應(yīng)與吸光度呈線性關(guān)系，而在實際測試中，如果樣品濃度較高，實際測得的吸光度值會偏離線性關(guān)系。誹謗定律的原因是雜散光、噪音、紫外-可見分光光度計的基線平坦度和光譜帶寬、樣品的預(yù)處理以及宣年的化學(xué)平衡。因此，通常不采用這種方法。

(4)標準曲線法紫外可見分光光度計較常用的定量分析方法是標準曲線法。首先用標準物質(zhì)配制一定濃度的溶液，然后配制成一系列標準溶液。在一定波長下，測試每種標準溶液的吸光度，并以吸光度值為縱坐標，與標準溶液對應(yīng)的濃度值為橫坐標繪制標準曲線。醉后，根據(jù)標準曲線繪制程序測量樣品溶液的吸光度值，并在標準曲線上找出相應(yīng)的樣品溶液濃度或含量:

制備的標準溶液的吸光度為0.1？在1.5的范圍內(nèi)，通過吸收測定的錒系元素密度可以達到0.5%。當(dāng)摩爾吸收系數(shù)ε；105升/(摩爾厘米)，光程1cm，濃度1X10-6？當(dāng)1.5X 10-5毫升/升時，0.1？吸光度在1.5的范圍內(nèi)。可以檢測到較低的濃度，但這主要取決于儀器的噪聲。有時由于儀器的噪聲限制，當(dāng)樣品太稀時，測量精度和重復(fù)性較差。還應(yīng)注意的是，分析和測試的上限不能設(shè)置為1.5。由于雜散光的限制，一些紫外-可見分光光度計儀器的檢測上限不能達到A=1.5，而一些儀器(如TU-1901等)。)α可以超過1.5，有些甚至達到α= 3或更高。綜上所述，紫外-可見分光光度計的低zui檢測濃度不僅與摩爾吸收系數(shù)有關(guān)，還與儀器的噪聲和光譜帶寬有關(guān)。然而紫外-可見分光光度計中zui的高檢測濃度不僅與摩爾吸收系數(shù)有關(guān)，還與儀器的雜散光和光譜帶寬有關(guān)。因此，用戶應(yīng)特別注意紫外-可見分光光度計雜散光噪聲(基線平坦度)和光譜帶寬的選擇。

(5)嘴的較小二乘法嘴的較小二乘法實際上是回歸方程。因為在分光光度法中，樣品的吸光度A和樣品的濃度C之間的關(guān)系可以用直線來描述。也就是說，c=aA+b(a和b是常數(shù))。

由于空間的限制，添加嘴較小二乘法的應(yīng)用范圍并不常見，所以本書沒有詳細討論嘴較小二乘法。但是，建議在應(yīng)用zui較小二乘法(回歸法)時應(yīng)注意兩點:

(1)回歸方程是在特定條件下得到的，不能隨便應(yīng)用；

(2)分光光度法中樣品吸光度A與樣品濃度C之間的關(guān)系應(yīng)建立在回歸方程的取值范圍內(nèi)，否則不能隨意外推。

(6)聯(lián)立方程的解聯(lián)立方程的解方法僅適用于在紫外區(qū)吸收峰不相互重疊的兩種或多種組分的測定，并且不是常用的方法。這本書也沒有詳細討論。

(7)差示分光光度法差示分光光度法不是紫外-可見分光光度計應(yīng)用中常用的方法。這本書也沒有詳細討論，但是應(yīng)該注意三點:

(1)在差示分光光度法中，選擇合適濃度的參比溶液非常重要。參考溶液離樣品溶液越近，測定結(jié)果就越準確；

(2)差示分光光度法解決了普通分光光度法不適用的高含量或痕量物質(zhì)的分析問題。

(3)差示分光光度法要求紫外-可見分光光度計具有良好的穩(wěn)定性和高靈敏度(低噪聲和雜散光)。

二、定性分析方法

一般來說，紫外-可見分光光度計難以或不可能用于定性分析(結(jié)構(gòu)極其簡單的物質(zhì)除外)。如果我們想確定一些復(fù)雜未知物質(zhì)的性質(zhì)，我們必須有紅外、質(zhì)譜、色譜、甚至光譜等儀器，除了紫外-可見分光光度計以外才能解決這個問題。然而，對于特定物質(zhì)，紫外吸收光譜數(shù)據(jù)可用于定性分析。有時標準物質(zhì)也可以用于定性分析。

(1)利用紫外吸收光譜數(shù)據(jù)定性確定，如果zui大吸收峰波長Amax、zui小吸收峰波Amin、zui大摩爾吸收系數(shù)emax，以及未知紫外吸收光譜吸收峰的數(shù)量、位置和拐點與標準光譜數(shù)據(jù)完全一致，則可視為同一化合物。然而，如果未知物質(zhì)的紫外吸收光譜具有更多的峰和更復(fù)雜的結(jié)構(gòu)，則只有一個紫外可見分光光度計不能用于定性分析。物質(zhì)的定性分析需要色譜、紅外、質(zhì)譜和光譜儀器的結(jié)合。

(2)紫外-可見分光光度計不能使用標準物質(zhì)對更復(fù)雜的樣品進行定性分析。然而，比爾定律α= &ε；Bc也可以寫成LgA = Lg &ε。+lgbc .因為bc只影響物質(zhì)的光吸收強度，而不改變吸收光譜的形狀，所以我們對同一化合物使用IgA和LG &ε。縱坐標上繪制的吸收光譜圖的形狀和橫坐標上的波長應(yīng)該一致。因此，在相同條件下，未知物質(zhì)的吸收光譜的測定可以通過與推斷化合物的真實標準物質(zhì)的吸收光譜直接比較來初步確定。

如果兩個吸收光譜的形狀和吸收峰的數(shù)量、位置和拐點完全一致，則可以初步確定未知物質(zhì)和標準物質(zhì)是同一物質(zhì)。然而，應(yīng)注意不同物質(zhì)但光譜相似的特殊情況。如十甲基聯(lián)苯和聯(lián)苯、菲和菲、聯(lián)萘和萘等。，由于雜質(zhì)的存在，有β；不飽和酮，而紫外吸收光譜相似。

(3)使用紫外吸收光譜的波長位置來初步判斷有機化合物的顯色基團，例如，如果在210處發(fā)現(xiàn)的話？如果在250納米處有強吸收峰，則可能有雙鍵，并且處于共軛狀態(tài)。在260納米、300納米和330納米有高強度吸收帶，表明有3？5個共軛單元；如果在270？300納米處的弱吸收(ε；=10？100)，表示羥基的存在；250？300納米具有中等強度吸收(ε；= 1000？10000)，表示苯環(huán)的特性等。

因為分子對紫外光的吸收僅僅是分子顯色基團和顯色基團的特征，而不是整個分子的特征。因此，僅通過紫外光譜來確定未知物質(zhì)的結(jié)構(gòu)或未知物質(zhì)的官能團是不現(xiàn)實的。通過結(jié)合紅外光譜、質(zhì)譜、核磁共振譜等方法，可以得出可靠的結(jié)論。

發(fā)色基團與某些分子的共軛效應(yīng)

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